《病原微生物检验》教学大纲（2018年春）

发布时间：2018-01-30 11:11

《病原微生物检验》教学大纲（宋黑二，居中）

供 卫生检验与检疫 专业用（宋小三，居中）

（注：以下标目用宋黑小四，填写内容用宋小四）

一、课程基本信息

课程名称：病原微生物检验（Pathogenic Microorganism Inspection Techniques）

课 程 号：504240035

课程属性：专业课、实验课

先修课程：病毒学检验、细菌学检验

学    分：3.5

学    时：84            理论学时：0     实验（实践）学时：84

二、教学目的及要求

病原微生物检验是病毒学检验和细菌学检验的配套实验课程，是卫生检验与检疫专业重要的专业课程之一，也是卫生检验与检疫专业学生必修的课程。实验内容包括病毒学检验和细菌学检验的基本技能、分离培养及鉴定技术、血清学技术，以及分子生物学技术。本课程实验项目以综合性实验为主，综合性实验所占比例为82.1%，通过实际操作训练，使学生加深对细菌学检验和病毒学检验基本理论、基本技能、检验方法、研究手段的理解和掌握，加深对常用分子生物学技术的认识和把握。在教学过程中，注重对学生实验操作规范性培养、实验现象和结果分析能力的培养，以及实验报告撰写能力的培养，全面提高学生分析和解决实际问题能力。

三、教学内容(下划双线示掌握内容，下划单线示熟悉内容；句尾的“*”示教学难点)：

 

实验1 动物接种技术与动物标本采集

1、动物接种：小鼠的腹腔接种、尾静脉接种^*以及灌胃^*

2、动物标本采集：胸腺、肝脏、脾脏、眼内眦取血^*、摘眼球取血

要求：熟悉动物实验常用的接种途径和标本采集

实验2  鸡胚培养、原代细胞培养

本实验为综合性实验。

1、原代细胞培养：选用10日龄的鸡胚，进行成纤维细胞的培养。

2、病毒的鸡胚培养^*：选用9~10日龄的鸡胚，采用尿囊腔途径接种病毒（新城疫鸡瘟病毒）。

要求：熟悉原代细胞培养及尿囊腔接种病毒的操作要点及影响因素。

实验3  传代细胞培养

    本实验为综合性实验。

选择生长良好的MDCK细胞，通过消化、分散、分装后进行培养。

要求：熟悉传代细胞培养的操作、要点。

实验4  血凝试验及血凝抑制试验

本实验包括血凝素单位的测定、血凝素单位的确证和血凝抑制试验^*。

要求：掌握血凝效价、血凝抑制效价的判断，熟悉实验的影响因素和操作要点。

实验5  病毒分离培养

本实验为综合性实验。

在长成单层的MDCK细胞上，接种病毒（腺病毒）后进行培养，显微镜观察细胞形态的变化，及细胞病变的类型。

要求：熟悉病毒的细胞培养的操作、要点，以及判断病毒感染细胞的程度。

实验6  PCR法测病毒

本实验为综合性实验。

利用PCR技术检测致病微生物致病基因，通过凝胶电泳观察结果。

要求：熟悉PCR技术的操作要点、影响因素及凝胶电泳的结果观察。

实验7  定量PCR检测病毒

本实验为综合性实验。

利用定量PCR技术检测致病微生物致病基因^*。

要求：熟悉定量PCR技术的操作要点、影响因素及结果观察。

 

实验8   病毒学检验案例分析、讨论

利用所学病毒学检验知识对病毒性感染的案例进行分组讨论。

要求：了解突发公共卫生事件的相关知识，熟悉判断疾病的病原的要点。

实验9  抗菌药物最小抑菌浓度测定

完成某抗菌药物最小抑菌浓度的测定^*。

要求：熟悉抗菌药物最小抑菌浓度测定的操作步骤、试验结果的判断以及试验的注意事项。

实验10  消毒剂的定量杀菌试验

本实验为综合性实验。

完成某消毒剂定量杀菌的最小杀菌浓度和最小杀菌时间的测定。

要求：熟悉消毒剂定量杀菌试验操作技术及结果计算方法。

实验11  细菌质粒的提取与鉴定

本实验为综合性实验。

从细菌中提取质粒，并用琼脂糖凝胶电泳检测提取出来的质粒，在凝胶成像分析仪中成像，分析。

要求：熟悉质粒的概念，掌握碱裂解法提取质粒的原理、步骤和注意事项，熟悉琼脂糖凝胶电泳，学会使用凝胶成像分析仪。

实验12   病原性球菌分离鉴定

本实验为综合性实验。

以金黄色葡萄球菌或溶血性链球菌为病原性球菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定全过程。

要求：熟悉病原性球菌分离鉴定的操作步骤，以及结果判断。

实验13  致病性肠道杆菌的分离鉴定

本实验为综合性实验。

以沙门菌或志贺菌为致病性肠道杆菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定和血清学分型^*。

要求：熟悉致病性肠道细菌分离鉴定的操作步骤，玻片凝集试验的基本要领，以及结果判断。

实验14  霍乱弧菌快速检验

本实验为综合性实验。

以水弧菌代替霍乱弧菌，完成细菌快速检验，包括：动力观察、制动试验、染色镜检等。

要求：熟悉霍乱弧菌快速检验的目的和操作步骤。

实验15  肠产毒素性大肠杆菌的分离鉴定

本实验为综合性实验。

从模拟污染样品开始，完成肠产毒素性大肠杆菌的增菌、分离、生化鉴定和毒素检测。

要求：熟悉肠产毒素性大肠杆菌的菌落特征、生化特性和毒素检测，掌握判断依据。

 

 

附：学时分配

 

实验项目	学时数
动物接种技术与动物标本采集	4
鸡胚培养、原代细胞培养	7
传代细胞培养	7
病毒分离培养	7
血凝试验及血凝抑制试验	4
PCR法测病毒	6
定量PCR法测病毒	3
病毒学检验案例分析、讨论	3
抗菌药物最小抑菌浓度的测定	7
消毒剂的定量杀菌试验	7
细菌质粒的提取与鉴定	4
病原性球菌分离鉴定	7
致病性肠道杆菌的分离鉴定	7
霍乱弧菌快速检验	4
肠产毒素性大肠杆菌的分离鉴定	7
总计	84

 

实验方式：每个实验项目要求学生在带习老师指导下自己独立完成，每2个学生为一个实验小组单位，共同完成所有的实验内容，每个实验结束后，每个学生独立完成一份实验报告。

基本要求：加强实验预习，熟悉实验步骤，掌握实验关键点和影响因素，能正确的判断和分析实验结果。

实验报告包括：实验目的，实验原理，主要试剂和仪器，实验步骤，结果，结论，讨论。

 

四、教材

张玉妥 主编：《卫生检验检疫实验教程：卫生微生物检验分册》，第一版， 人民卫生出版社，2015.12

 

五、参考书目

1. 裴晓方 主编：《病毒学检验》，第二版，人民卫生出版社，2015.4

2. 唐非、黄升海 主编：《细菌学检验》第二版，人民卫生出版社，2015.4

 

 

 

六、成绩评定

本实验课程以考核加考试的方式对学生学习成绩进行评定。平时成绩部分为：实验报告 30%、考勤和学习态度10%、实验操作30% ；期末实验理论闭卷考试占30%。

 

                                          

系：卫生检验与检疫系

编写（修订）人：汪川、左浩江

2018年1月

 

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