《免疫学检验实验》教学大纲(2018年秋)
发布时间:2018-09-04 17:11
《免疫学检验实验》教学大纲
供 卫生检验与检疫 专业用
一、课程基本信息
课程名称:免疫学检验实验(Experimental Immunology Techniques)
课程号(代码):504208030
课程属性:专业课程(实验课)
先修课程:医学免疫学、免疫学检验
学分:3
总学时:72 实验(实践)学时
二、教学目的及要求
免疫学检验实验是免疫学检验的配套实验课程,是卫生检验与检疫专业重要的专业课程之一,也是卫生检验与检疫专业学生必修的考试课程,其作用是使学生能在理论课学习的基础上,进一步理解学习内容,学习如何把握实验步骤,正确判断和分析实验结果,达到训练学生分析问题、解决问题能力和规范实验操作的目的。本课程实验项目以综合性实验为主,综合性实验所占比例为90.3%。实验主要内容包括免疫学检验基本技术、总补体活性测定、ELISA、免疫金、荧光免疫试验、抗体生成细胞的检测(溶血空斑法)、吞噬试验、NK细胞活性测定、淋巴细胞转化实验(MTT法)、外周血淋巴细胞表面标志物染色、蛋白SDS-PAGE电泳分离。在教学过程中,注重对学生实验操作规范性培养、实验现象和结果分析能力的培养,以及实验报告撰写能力的培养,全面提高学生分析和解决实际问题能力。
实验方式:整个实验课程要学生自己完成,每2个学生为一个实验单位,共同完成所有的实验内容。
基本要求:熟悉实验步骤,掌握实验关键点和影响因素,能正确地判断和分析实验结果。
实验报告包括:实验目的、原理、主要试剂和仪器、实验步骤、结果、结论、讨论等。
三、教学内容
实验1 免疫学检验基本技术
掌握免疫学检验技术中常用的动物实验技术和细胞制备技术。
给小鼠做记号,处死,取肝、脾研磨,洗涤后用血细胞计数板计数,计算细胞悬液细胞浓度。人外周血用淋巴细胞分层液分出淋巴细胞,洗涤,计数,计数细胞浓度。
实验2 总补体活性测定
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素
在绵羊红细胞与溶血素系统中加入不同稀释度的补体,使50%红细胞发生溶血的补体浓度即定为补体活性。
实验3-1 ELESA(双抗体夹心法)——血清中HBsAg的测定
本实验为综合性实验。
1、掌握方法的原理,熟悉酶标仪的使用
2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素
在已包被HBsAb的板子中加入待检血清,孵育,洗涤,再加入酶标记HBsAb,孵育,洗涤,加入底物,孵育,终止反应,酶标仪检测。
实验3-2 免疫金层析实验——血清中HBsAg的测定
本实验为综合性实验。
1、掌握方法的原理
2、掌握实验的结果判断及影响因素
利用吸附在纤维膜上的免疫胶体金(抗体)进行标本中抗原的检测。若标本中有与免疫胶体金相对应的抗原,即可在膜上出现2条红色的线。
将购买的测试条放入待测血清中,数秒后取出,观察红色线是否出现,判断结果。
实验4 间接免疫荧光技术——标本中水弧菌的检测
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理,了解荧光显微镜的使用和工作原理
2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素
将待测细菌涂布在玻片上,自然干燥,固定,加上兔抗水弧菌抗体,37℃湿盒30分钟,洗涤后滴加羊抗兔荧光抗体,37℃湿盒30分钟,洗涤,待干后,盖片封片,荧光显微镜观察。
实验5 淋巴细胞转化实验
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素
取出小鼠脾,制成脾细胞悬液,加入24孔培养板中(2孔),一孔加ConA液(相当于7.5µg/ml),一孔作为对照,置CO2培养箱培养68h后,取出培养板,换上清,加MTT液(5mg/ml),培养4h。加入酸性异丙醇,溶解紫色结晶。在570nm波长处测定OD值,以加ConA孔OD值的均值减去未加ConA孔OD值的均值代表淋巴细胞的增值能力。
实验6 溶血空斑试验——小鼠抗体生成细胞的检测
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素
无菌取出已用绵羊红细胞免疫5天的小鼠脾细胞,碾磨,洗涤,制成脾细胞悬液,在50℃水浴预温,与同样处理的绵羊红细胞悬液、琼脂混合后制板,37℃ CO2 孵箱孵育2h,加入1:8稀释的新鲜补体,37℃ CO2 孵箱孵育2h,计数空斑形成细胞的数量。
实验7 NK细胞活性——乳酸脱氢酶(LDH)测定法
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果计算及影响因素
当细胞受到NK细胞杀伤后,细胞内的LDH释放到细胞外,加入LDH的底物,即可产生紫红色的产物,经490nm检测,可计算出NK细胞的活性。
取出小鼠脾,制成脾细胞悬液,加入96孔板中,再加入等量靶细胞,37℃ CO2 孵箱孵育4h,离心,取出上清于另一96孔板,加入底物,作用15分钟,加HCI终止反应,490nm测定OD值,按公式计算NK细胞的活性。
实验8 吞噬实验小鼠吞噬细胞吞噬鸡红细胞实验——半体内法
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果计算及影响因素
取20%绵羊红细胞悬液1ml注入小鼠腹腔,30分钟,再注入2mlNS,揉腹部1分钟,取出腹腔液,滴加在玻片上,37℃湿盒孵育30分钟,NS洗涤、固定、染色,显微镜观察。
实验9 外周血淋巴细胞表面标志物染色
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果计算及影响因素
3、了解流式细胞仪的操作和应用
试管中加入流式荧光抗体,再加入人外周血细胞样本,避光孵育15min,每管加入细胞裂解液,避光孵育10min,离心去上清,加入PBS,混匀,上流式细胞仪分析。
实验10 蛋白SDS-PAGE电泳分离
本实验为综合性实验。
1、理解方法的原理
2、掌握实验的关键点、结果观察及影响因素
3、了解SDS-PAGE电泳的操作和应用
培养细菌,提取细菌全蛋白。制样品胶和分离胶,蛋白样品与上样缓冲液混合煮沸处理后上样,电泳。电泳完毕取下胶,考马斯亮蓝染色,洗脱,观察结果,分析。
附:学时分配
实验项目 | 学时数 |
免疫学检验基本技术 | 7 |
总补体活性测定 | 4 |
ELISA(夹心法、免疫金) | 7 |
间接免疫荧光实验 | 4 |
淋巴细胞转化实验 | 8 |
抗体生成细胞检测 | 8 |
NK细胞活性 | 8 |
吞噬实验 | 8 |
外周血淋巴细胞表面标志物染色 | 10 |
蛋白SDS-PAGE电泳分离 | 8 |
总计 | 72 |
四、教材
1. 张玉妥主编,卫生检验检疫实验教材:卫生微生物检验分册,第1版,人民卫生出版社,2015年
五、参考书目
1. 徐顺清,刘衡川主编,免疫学检验,第2版,人民卫生出版社,2015年
2. 王兰兰、许化溪主编,临床免疫学检验,第5版,人民卫生出版社,2012年
3. 张赟、温伟红主编,细胞和分子免疫学实用实验技术,第四军医大学出版社,2013年
六、成绩评定
本实验课程的成绩评定为全过程性评价,最终成绩包括多项内容,含实验报告、实验操作和实习态度等。
系: 卫生检验与检疫系
编写(修订)人:汪川
2018年 7 月 23 日
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